PCR-DNA實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

    1．加樣方面（混勻，不要有氣泡，管壁上不要有液體）
    2．試劑方面（冷凍，不宜反復(fù)凍融超過3次；可分裝）
    3．使用非肝素鈉抗凝劑采血管
    4．實(shí)驗(yàn)室方面（實(shí)驗(yàn)做完注意通風(fēng)、84清理臺(tái)面、紫外線殺菌）
    5．注意污染（平常配試劑管蓋的放置不要污染、加樣時(shí)指甲及手套不要碰到管內(nèi)壁）
 

    實(shí)驗(yàn)操作步驟
    1.室溫融解；
    2.取血清（或標(biāo)準(zhǔn)品）50ul加入50ul核酸提取液先震蕩混勻10秒然后6000轉(zhuǎn)瞬間離心一下（等離心機(jī)轉(zhuǎn)速到了接近6000按停止）99度水煮或干浴10分鐘，稍微彈碎；然后13000轉(zhuǎn)離心10分鐘保留上清液備用
    3.配混合液
    取N*36ul混合液+N*0.4ulTAQ酶混勻（先震蕩混勻10秒然后6000轉(zhuǎn)瞬間離心）（N為管數(shù)，實(shí)際上我們要取N+1因?yàn)榧訕庸鼙谏蠒?huì)沾液不多配會(huì)導(dǎo)致zui后一個(gè)有誤差例如有10個(gè)樣本則取11*36+11*0.4；）
    4.取上述混合液36.5ul分別加入pcr反應(yīng)管不要有氣泡管壁不要有水珠
    5.加樣取4ul上清液加入pcr管加樣槍在液體里面反復(fù)打個(gè)7~8下zui后在離心機(jī)稍微離一下6000轉(zhuǎn)瞬間離心6.上機(jī)反應(yīng)檢查管壁水珠氣泡
 

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果方面
    1.標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)至少為-0.99越小越好
    2.根據(jù)曲線分析結(jié)果（曲線是否穩(wěn)，無波浪）38循環(huán)曲線抬頭為陰性
    實(shí)線抬頭曲線不抬頭為YMDD變異（實(shí)線---病毒量虛線---判斷有無變異）
    21個(gè)循環(huán)值大概為7次方后面加3.5個(gè)循環(huán)減少一個(gè)次方即24.5左右為6次方......
 

    友情提示：上述操作不一定全正確，請自行參考各試劑廠試劑說明書以及檢驗(yàn)方面相關(guān)資料。