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上海遠慕生物科技有限公司

Plasmid Mini Kit I(100)
點擊次數(shù):2366 更新時間:2017-10-13

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名稱:質粒小量提取試劑盒I型

品牌:Omega

供應商:上海遠慕

系列:質粒小量提取試劑盒

型號:Plasmid Mini Kit I(100)

貨號:D6943-01

用途:從小于5ml培養(yǎng)過夜的細菌培養(yǎng)液中純化約35ug質粒DNA

質粒小量提取試劑盒I型,Plasmid Mini Kit I(100)

質粒小量提取試劑盒特性與優(yōu)點:
安全-無酚lvfang等危險的有機物抽提
簡單-硅膠柱過濾操作
快速-在30分鐘內完成多個樣品的抽提工作
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質粒小量提取試劑盒I型,Plasmid Mini Kit I(100)操作步驟:

1、取1-5ml細菌培養(yǎng)物,12000rpm離心1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉6-8次使菌體讓其裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細菌基因組DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過5min,以免質粒受到破壞。

4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10min,用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水yichun),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

10、為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。 

 

 

質粒小量提取試劑盒I型注意事項:

1.使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

2.洗脫緩沖液體積不應少于50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH值低于7.0會降低洗脫效率,DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,以防DNA降解。

3.如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用5-10ml過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間,以增加提取效率。

 

 

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