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影響酶免疫測定結(jié)果的標本?
點擊次數(shù):996 更新時間:2016-10-31

    可能影響酶免疫測定結(jié)果的標本外源性干擾因素


    外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長和標本凝固不全等。
    1.標本溶血
    要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。


    2.標本被細菌污染
    樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。


    3.標本貯存時間過長
    標本在2~8~C下保存時間過長,IgG可聚合成多聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8~C下保存1周,如為有菌操作,則建議冷凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在一70~C以下。


    4.標本凝固不全
    血液采集后,如收集管中無促凝劑和抗凝劑,則血液通常在半小時后開始凝固,18~24h*凝固。日常檢驗中,常在血液還未開始凝固時即離心分離血清,此時因血液沒有*凝固,離出的“血清”并非為*的血清,其中仍殘留部分纖維蛋白原,如將其加入微孔中,在ELISA測定過程中仍可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果。因此,血液標本采集后,應(yīng)使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?/span>


    5.冷凍保存標本避免反復(fù)凍融
    冷凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。此外,標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的渾濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

 

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