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Flag標(biāo)簽蛋白檢測抗體實(shí)驗(yàn)應(yīng)用說明
點(diǎn)擊次數(shù):569 更新時間:2022-12-14

  Flag標(biāo)簽蛋白檢測抗體

  遠(yuǎn)慕生物提供可用于WB,IF,IP應(yīng)用的Flag抗體,特異性檢測Flag標(biāo)簽融合蛋白,F(xiàn)lag標(biāo)簽抗體可識別在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的Flag標(biāo)記重組蛋白,包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重組蛋白。

  Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽( DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞等多種細(xì)胞類型,相應(yīng)的Flag標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標(biāo)簽可以通過加入腸激酶處理去除,腸激酶專一識別該肽序列C末端的5個氨基酸殘基。Flag抗體可以用于檢測和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達(dá)蛋白等。

  由于Flag標(biāo)簽蛋白檢測抗體親水特性,F(xiàn)lag標(biāo)簽往往位于融合蛋白的表面上,因此比較容易被抗體接近并識別。不同的Flag標(biāo)簽抗體與Flag標(biāo)簽 有不同的識別和結(jié)合特性。

  Fig. 1. Flag標(biāo)簽蛋白IP實(shí)驗(yàn),IP (1:200) - WB (1:5,000):未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞裂解液(lane A), 轉(zhuǎn)染了Flag標(biāo)簽蛋白的293細(xì)胞轉(zhuǎn)染裂解液 (lane B), 使用小鼠IgG作為陰性對照免疫沉淀293細(xì)胞裂解液(lane C),使用Flag單克隆抗體(1B10)IP轉(zhuǎn)染后的293細(xì)胞裂解液(lane D), 293細(xì)胞裂解液 中僅加入Protein G Beads (lane E).

  Fig. 2. 使用Flag標(biāo)簽單克 隆抗體,通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)(1:2000),分析轉(zhuǎn)染的Flag 重組蛋白在293細(xì)胞中的定 位,二抗為IFKine? Red 驢抗 小鼠,藍(lán)色為DAPI染色的細(xì) 胞核。

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