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考馬斯亮藍G250和考馬斯亮藍R250的區(qū)別
點擊次數(shù):860 更新時間:2023-01-05

有兩種考馬斯亮藍:考馬斯亮藍G250和考馬斯亮藍R250。前者在結(jié)構(gòu)上比后者多兩個甲基。名字中的“G"是綠色的縮寫,因為考馬斯亮藍G250的藍色染料是淺綠色;名字中的“R"是紅色的縮寫,因為R250的藍色染料是微紅的;


">“250"代表考馬斯亮藍R250的純度。在生化實驗中,考馬斯亮藍R250常用在蛋白質(zhì)定量和蛋白質(zhì)電泳中的蛋白質(zhì)染色。


工作原理是:考馬斯亮藍R250經(jīng)過蛋白質(zhì)中氨基和羧基之間的靜電結(jié)合和范德華力與蛋白質(zhì)形成強但非共價連接的復合物。蛋白質(zhì)-染料復合物的形成穩(wěn)定了染料攜帶的帶負電荷的陰離子(例如磺酸基團),從而在膜或膠上產(chǎn)生肉眼可見的藍色。


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考馬斯亮藍R250多用于電泳蛋白的染色,染色靈敏度相比氨基黑要高出5倍,可達0.1μg蛋白。考馬斯亮藍R250染色后,需要先褪色再觀察蛋白條帶。


考馬斯亮藍G250 盡然靈敏度較低,也可用作 R250 的替代品,是一種快速簡便的蛋白質(zhì)染色方法。它具有以下特點,即在pH 2.0以下,溶液為無色;pH 7.0 時,溶液呈深藍黑色;如果酸化,溶液是透明的棕褐色。當 G250 與蛋白質(zhì)結(jié)合時,溶液恢復為藍色,這主要是由于蛋白質(zhì)分子周圍的 pH 值較中性。在合適的條件下,當凝膠在酸化的 G250 溶液中染色時,它顯示出藍色的蛋白質(zhì)條帶,帶有淺琥珀色背景。


此法條帶顯影快,底色也很淺,條帶看起來清晰,不需褪色。G250 對大多數(shù)蛋白質(zhì)的檢測下限為 0.5 g。 雖然靈敏度有所降低,但操作快捷方便,與R250 染色相比最多可節(jié)省 11 小時。



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