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核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系介紹
點(diǎn)擊次數(shù):535 更新時(shí)間:2023-02-16

核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系

(1)DNA分子的大小 在凝膠中,DNA片段遷移距離(遷移率)與堿基對(duì)的對(duì)數(shù)成反比,因此通過(guò)已知大小的標(biāo)準(zhǔn)物移動(dòng)的距離與未知片段的移動(dòng)距離時(shí)行比較,便可測(cè)出未知片段的大小。但是當(dāng)DNA分子大小超過(guò)20kb時(shí),普通瓊脂糖凝膠就很難將它們分開(kāi)。此時(shí)電泳的遷移率不再依賴于分子大小,因此,就用瓊脂糖凝膠電泳分離DNA時(shí),分子大小不宜超過(guò)此值。

(2)瓊脂脂糖的濃度 如下所示,不同大小的DNA需要用不同濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。

瓊脂糖濃度與DNA分離范圍


瓊脂糖濃度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0

線狀DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1

如何選擇瓊脂糖凝膠的濃度來(lái)分離DNA

總體原則是:分子量大的DNA,電泳時(shí)使用濃度較小的凝膠反之亦反。膠濃度越大,電泳速度越小;若膠濃度偏高,可能跑不動(dòng),條帶縮在一起;若膠濃度過(guò)低,可能跑得太快,同樣分不開(kāi)。可參考下面的對(duì)應(yīng)關(guān)系:

凝膠濃度(%) 線性DNA長(zhǎng)度(bp)

0.5 1000~30000

0.7 800~12000

1.0 500~10000

1.2 400~7000

1.5 200~3000

2.0 50~2000

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